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產品說明：

產品描述：

本品用DMSO溶解，因為DMSO熔點是18.3℃,使用前請放置到室溫充分溶解。

產品特點：

1.無毒性：花菁染料，無致癌性。

2.高敏性：紫外凝膠透射儀觀測靈敏度蓋于EB染色法5-20倍，用可見光透射儀比紫外光條件下的靈敏度比EB染色法高20-30倍。

3.信噪比高：樣品熒光信號強，無背景信號。

4.操作簡單：無須脫色或沖洗，即可用紫外凝膠透射儀觀察或可見光透射儀觀察

5.使用范圍廣：可適用于多種電泳分析，如瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

6.使用方便：不影響其他修飾酶左右（如：Taq 酶、內切酶、T4連接酶、反轉錄酶等）。

7.經濟：價格比銀染便宜（例如：1ml稀釋10倍，即使10000ul可以使用10000次）。

使用方法：

1.膠染法（用法通EB）

1）制膠時加入SYBR Green I 核酸染料。冷卻膠到 50℃左右，每 100ml 膠中加入1-3μl SYBR Green I 核酸染料。按照常規方法進行電泳即可。

2）用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內觀測。

注：此方法染色能準確確定片段分子量且用量較少。1ml 染料可以做 1000 塊10 ml 膠，每塊膠點 50 個樣，可做 50000 次。

2.點染法

該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

1）工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR Green I 稀釋100倍，即為SYBR Green I     工作液。SYBR Green I 工作液可以置2～8℃保存一個月以上, 濃縮液在-20℃保存半年。

制膠：按常規方法制膠，不含任何染料。

2）樣品染色：向分析樣品中加入SYBR Green I 工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，使SYBR Green I 與樣品中DNA充分結合。SYBR Green I 工作液加入量為總上樣量的1/5～1/10。

3）DNA Marker染色：將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μL SYBR Green I 工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR Green I 與DNA充分結合。

4）上樣、電泳：按常規操作。用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內觀測。

*注：用點染法染色時，靈敏度最高，染料用量最少。通常點一個樣加入 1μL 即可，可以使用 10000 次, 但大片段稍有滯后現象，如果需要更準確確定分子量(與Marker對比)，建議使用膠染法。

3.泡染法

按照常規方法進行制膠，其中不含任何染料。

1）用 pH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如：TAE, TBE)，按照 1﹕1000 的比例稀釋SYBR Green I 核酸染料，混勻，制成染色溶液。

2）將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。 室溫振蕩染色 10-30 分鐘，染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直 接在玻璃平皿上染色，將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上，讓稀釋液均勻地覆 蓋整個膠板，并染色 30 分鐘。玻璃平皿必須預先經過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

3）用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內觀測。

*注：用泡染方法染色時，可以精確確定核酸片段分子量。但染料用量是三種方法中用量最大的。

幾種染色方法特點比較:

注意事項：

1）Sybr Green 核酸染料樣品點染方法中，電泳不要超過 2 小時，以免核酸染料從 DNA/RNA 上分離出來，產生彌散狀條帶。

2）用點染方法染色時，條帶稍有滯后現象，如果需要確定片段精確分子量（和 Marker 對比），建議用膠染法和泡染法。

3）常規用酒精沉淀核酸過程中，SYBR Green I 核酸染料可以全部從核酸上去掉。

4）DNA電泳請選擇SYBR Green I 染料，RNA 電泳請選擇SYBR Green II染料，兩種染料不通用。

5）SYBR Green I 核酸染料對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染 色等使用過程中用聚丙烯類容器。

6）可以加Orange Red 作為標記. pH值在7.5-8.3之間,不要微波加熱,加入熱膠的溫度低于50度

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。