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特性說明：

產品說明：

脂質體轉染試劑(Transfection Reagent)是一款多用途轉染試劑，適用于核酸(DNA、RNA)的轉染，能在絕大多數貼壁和懸浮細胞(哺乳動物細胞系)提供高效轉染。獨特的配方使其能直接加入培養基，血清的存在不會影響轉染效率。轉染后無需去除DNA- 轉染試劑復合物或更換培養基，也可根據自身需求在轉染4-6h后更換新鮮培養基。

本品以無菌液體形式提供，濃度為1mg/ml.通常情況下，對于24孔板的DNA轉染，每次用2μl左右, 則1.5ml轉染試劑約可轉染750個孔;對于24孔板的siRNA轉染，每次用1μl左右， 則1.5ml轉染試劑約可轉染1500個孔;

注意事項：

1）脂質體轉染試劑要求細胞鋪板密度較高，以90%-95%為佳，這有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響；如果你研究的基因要求比較長的表達時間，比如細胞周期相關基因，或者細胞表面蛋白，最好選擇細胞鋪板密度要求較低的轉染試劑，不適合用脂質體核酸轉染試劑。

2）脂質體轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前后不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。另外，要檢測所用的無血清培養基與脂質體核酸轉染試劑的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。

3）轉染的時候培養基中不能添加抗生素。

4）使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率，質粒中的內毒素是轉染的大敵。

5）陽離子脂質體應該在4度保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。

6）初次使用應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2-1:3，比如24孔板內接種0.5-2×105個細胞，使用0.5 μg DNA和1-1.5 μL 轉染試劑。通過調整DNA/脂質體轉染試劑比例優化轉染效率，保證細胞密度大于90%，DNA（μg）: 轉染試劑比值在1：0.5-1：5。

操作流程（以24孔板為例，其他培養板加樣體積請參考表一）

注：轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優化最佳使用量。

貼壁細胞：轉染前一天（20-24小時），胰酶消化細胞并計數，細胞鋪板（不含抗生素），使其在轉染時密度為90-95%（0.5-2 × 105 cells/well for a 24-well plate）。

懸浮細胞：轉染當天，配制DNA復合物之前，24孔板中細胞鋪板，每500 μL生長培養基（不含抗生素）中加入4-8 × 105 cells。

1. 按照以下體系配制DNA-脂質體轉染試劑復合物：

1）對于每孔細胞，使用50 μL無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.5 μg DNA。混勻。

2）對于每孔細胞，使用50 μL無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋0.6-2.5 μL 脂質體轉染試劑。

脂質體轉染試劑稀釋后室溫孵育5 min（在30 min內同稀釋的DNA 混合，保溫時間過長會降低活性）。

注意：即使脂質體核酸轉染試劑使用OPTI-MEMⅠ稀釋，細胞也可以使用DMEM 培養。如果DMEM 作為脂質體核酸轉染試劑的稀釋液，必須在5 min內同稀釋的DNA混合。

2. 混合稀釋的DNA和稀釋的脂質體核酸轉染試劑（總體積100μL），輕輕混勻，并在室溫（15-25℃）孵育20 min，使得DNA-脂質體復合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染。

注意：DNA-脂質體復合物室溫至少穩定保存5h。

3. 直接將100 μL DNA-轉染試劑復合物加入到細胞培養板每個孔中，搖動培養板，輕輕混勻。

注意：如果在無血清條件下轉染，使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基，替換為500 μL無血清培養基。

4. 37℃，5% CO2培養箱培養24-48 h，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換培養基。然而，可能有必要在4-6 h后更換生長培養基，不會降低轉染活性。

穩轉細胞株：轉染24 h后，按照1：10或更高比例在細胞中加入新鮮生長培養基，轉染48 h后加入篩選培養基。

懸浮細胞株：在細胞中加入DNA-轉染試劑復合物后，如果需要可以4 h后加入PMA和/或PHA。對于Jurkat細胞，PHA和PMA的終濃度分別為1 μg/mL和50 ng/mL，可以提高CMV啟動子活性和基因表達。對于K562細胞，只加入PMA足以提高啟動子活性。

轉染體系的調整

對于不同的細胞培養板，脂質體轉染試劑、DNA、細胞和培養基的使用量會有所不同，具體請參考下表（表一）。對于96 孔板培養，不需要提前一天進行細胞鋪板，可以直接在平板中制備復合物，然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了，這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H，293-F，COS-7L和CHO細胞的試驗，同傳統方法相比活性稍低。快捷的步驟和蛋白表達細胞系的高效轉染使得脂質體核酸轉染試劑非常適用于96 孔板的高通量轉染，比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。

表一：在不同的培養容器中轉染，脂質體核酸轉染試劑，核酸，細胞和培養基的用量

1 不同廠商提供的細胞培養板表面積可能有所不同；

2 稀釋DNA或RNAi所用的培養基體積。

注：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時DNA（μg）:轉染試劑（μL）比值保持在1:0.5-1:5。

本產品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應用或其他用途。