SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in DMSO) 核酸凝膠染料

產品描述： 本品用DMSO溶解，因為DMSO熔點是18.3℃，使用前請放置到室溫充分溶解。 

產品特點： 1、無毒性：花菁染料，無致癌性。 

2、高敏性：紫外凝膠透射儀觀測靈敏度高于EB染色法5-20倍，用可見光透射儀比紫外 光條件下的靈敏度比EB染色法高20-30倍。 

3、信噪比高：樣品熒光信號強，無背景信號。 

4、操作簡單：無須脫色或沖洗，即可用紫外凝膠透射儀觀察或可見光透射儀觀察 

5、使用范圍廣：可適用于多種電泳分析，如瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。 

6、使用方便：不影響其他修飾酶左右（如：Taq 酶、內切酶、T4連接酶、反轉錄酶等）。 

7、經濟：價格比銀染便宜（例如：1ml稀釋10倍，即使10000ul可以使用10000次）。

使用方法： 一、膠染法（用法通EB）( 推薦方法) 

1、制膠時加入SYBR Green I 核酸染料。冷卻膠到 50℃左右，每 100ml 膠中加入1-3μl SYBR Green I 核酸染料。

 2、按照常規方法進行電泳即可。

 3、用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時， 可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內觀測。 *注：此方法染色能準確確定片段分子量且用量較少。1ml 染料可以做 1000 塊10 ml 膠， 每塊膠點50個樣，可做50000次。

 二、點染法

1、該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

2、工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR Green I 稀釋100倍，即為SYBR Green I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置2～8℃保存一個月以上， 濃縮液在-20℃保存半年。 

3、制膠：按常規方法制膠，不含任何染料。 

4、樣品染色：向分析樣品中加入SYBR Green I 工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘， 使SYBR Green I 與樣品中DNA充分結合。SYBR Green I 工作液加入量為總上樣量的1/5～ 1/10。

5、DNA Marker染色：將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μL SYBR Green I 工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR Green I 與DNA充分結合。 

6、上樣、電泳：按常規操作。用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻 璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內觀測。 *注：用點染法染色時，靈敏度最高，染料用量最少。通常點一個樣加入 1μL 即可，可以 使用 10000 次， 但大片段稍有滯后現象，如果需要更準確確定分子量(與Marker對比)，建 議使用膠染法。

 三、泡染法 

1、按照常規方法進行制膠，其中不含任何染料。 

2、用 pH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如：TAE， TBE)，按照 1﹕1000 的比例稀釋SYBR Green I 核酸染料，混勻，制成染色溶液。 

3、將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室 溫振蕩染色 10-30 分鐘，染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直 接在玻璃平 皿上染色，將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上，讓稀釋液均勻地覆 蓋整個膠板，并染色 30 分鐘。玻璃平皿必須預先經過硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

 4、用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀測。藍光可透過玻璃，觀測聚丙烯酰胺凝膠時， 可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見光透射儀內觀測。 *注：用泡染方法染色時，可以精確確定核酸片段分子量。但是三種方法中染料用量最大的。

保存方法： 2-8℃避光干燥保存，有效期 24 個月。

注意事項： 1、Sybr Green 核酸染料樣品點染方法中，電泳不要超過 2 小時，以免核酸染料從 DNA/RNA 上分離出來，產生彌散狀條帶。

2、用點染方法染色時，條帶稍有滯后現象，如果需要確定片段精確分子量（和 Marker 對比），建議用膠染法和泡染法。 

3、常規用酒精沉淀核酸過程中，SYBR Green I 核酸染料可以全部從核酸上去掉。 

4、DNA電泳請選擇SYBR Green I 染料，RNA 電泳請選擇SYBR Green II染料，兩種染 料不通用。

5、SYBR Green I 核酸染料對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、 染 色等使用過程中用聚丙烯類容器。 

6、加Orange Red 作為標記，pH值在7.5-8.3之間，不要微波加熱，加入熱膠的溫度低于 50度。 

7、獨立實驗室進行的艾姆斯試驗表明SYBR Green I的致突變性明顯比EB要低很多。但是，必須警告用戶注意，目前尚無關于SYBR Green I對人體的致突變性或毒性的數據。由于該染料與核酸結合，應當被看作潛在誘變劑，使用時要小心謹慎。在處理DMSO儲存液時應特別小心，因DMSO能促進有機分子進入組織。染料的廢棄處理應當符合當地的規定。